Προσδιορισμός ποιοτικών και γενετικών παραμέτρων σπέρματος καπρων υψηλής και μειωμένης γονιμότητας σε επίπεδο εκτροφής (Master thesis)

Στραβογιάννη, Βασιλική


Sperm quality assessment involves qualitative and quantitative indicators, measurable at laboratory level, reflecting to a certain extent the production capacity of sperm and partly the potential fertilization capacity of the ejaculation. In addition, the identification of genes involved in the spermatogenesis mechanism and in the qualitative characteristics of the sperm is invaluable information for the selection of males based on sperm quality. This particular study refers to the comparison of the results of the laboratory classification of 6 boars' ejaculates in high and low fertility based on the quality of the semen from the data kept in the farm from estrus return rates and fertility rates. Furthermore, possible polymorphisms were investigated in five genes P450scc, P45017a, P450arom, 3b-HSD, StAR, after blood sampling. In our research, six boars were involved as semen donors and 48 (6x8) ejaculates were collected over 4 months. The sperm samples were diluted in a final concentration of 30 x 106 sperm / ml and they were used in the farm. At the same time, an aliquot of each sperm sample was transferred within 1 hour to the lab of the Farm Animal Clinic of the Veterinary Medicine School of Aristotle University in an isothermal box and stored at 16-18oC. The parameters that were estimated for each sample of semen were: viability, motility and the individual kinetic parameters of spermatozoa, morphology, biochemical activity of the cell membrane and DNA fragmentation. Vitality and morphology were estimated after the application of double staining eosin-nigrosin. Motility and kinetic characteristics of spermatozoa were examined by computer assisted semen analyzer (CASA). The biochemical activity of the spermatozoa cell membrane was examined by applying the HOST (Hyposmotic Swelling Test) test. The Acridine Orange Test (AOT) was used for the evaluation of sperm nuclear chromatin integrity. In order to isolate the DNA from the blood of each boar, the PCR polymerase chain reaction was performed and the existence of polymorphisms in the 5 genes was investigated. Collected data were analyzed with the use of a General Linear Mixed Model by the statistical software: Statistical Analysis Systems version 9.0 (SAS Institute Inc., 1996, Cary, N.C., U.S.A.) and the level of significance was set at p<0.05. Although our results showed that the total motility varied in normal values in both boar groups, the group of high fertility indicated higher values. Statistical significant differences were found between groups A and B in progressive motility % (“high fertility”: 73,09 ± 2,64, “low fertility”: 64,06 ± 2,64). Additionally, there was a statistically significant difference in the percentage of rapid moving spermatozoa (“high fertility”: 62.88 ± 2.79, “low fertility”: 53.60 ± 2.79) and in the percentage of those who moved slowly (“high fertility”: 9.28 ± 1.94, “low fertility”: 17.00 ± 1.94). Most of the individual kinetic parameters of spermatozoa showed better values in the group of high fertility boars, while a statistically significant difference was observed in VCL, VSL, BCF, WOB between the two groups. No statistically significant differences were found between the two groups of boars in vitality and morphology, but there was statistically significant difference in morphological tail abnormalities ("high fertility ": 3.42 ± 0.23, "low fertility ": 4,47 ± 0,23). As far as the biochemical activity of the spermatozoa cell membrane is concerned, a statistically significant difference ("high fertility ": 60.30 ± 1.16, "low fertility ": 49.24 ± 1.16) was observed. DNA fragmentation was almost zero in both groups. Finally, polymorphisms and mutations in the selected genes were not detected and this fact might require further research.
Institution and School/Department of submitter: Σχολή Τεχνολογίας Γεωπονίας και Τεχνολογίας Τροφίμων και Διατροφής. Τμήμα Ζωικής Παραγωγής.
Keywords: Κάπρος;Ποιότητα σπέρματος;CASA;HOST;DNA;Πολυμορφισμός γονιδίων;Boar;Sperm quality;Fragmentation;Genes polymorphisms
Description: Μεταπτυχιακή εργασία - Σχολή Τεχνολογίας Γεωπονίας και Τεχνολογίας Τροφίμων και Διατροφής - Τμήμα Ζωικής Παραγωγής, 2019 (α/α 10676)
URI: http://195.251.240.227/jspui/handle/123456789/14027
Item type: masterThesis
General Description / Additional Comments: Μεταπτυχιακή εργασία - ΠΜΣ "Συστήματα Ακριβείας στη Ζωική Παραγωγή"
Submission Date: 2022-03-01T14:59:42Z
Item language: el
Item access scheme: free
Institution and School/Department of submitter: Σχολή Τεχνολογίας Γεωπονίας και Τεχνολογίας Τροφίμων και Διατροφής. Τμήμα Ζωικής Παραγωγής.
Publication date: 2019-01-15
Bibliographic citation: Στραβογιάννη, Β. (2019). Προσδιορισμός ποιοτικών και γενετικών παραμέτρων σπέρματος καπρων υψηλής και μειωμένης γονιμότητας σε επίπεδο εκτροφής (Μεταπτυχιακή εργασία). Αλεξάνδρειο ΤΕΙ Θεσσαλονίκης.
Abstract: Η αξιολόγηση της ποιότητας του σπέρματος αφορά ποιοτικούς και ποσοτικούς δείκτες, μετρήσιμους σε επίπεδο εργαστηρίου, αντικατοπτρίζοντας ως ένα βαθμό τη λειτουργικότητα των όρχεων ως προς τη σπερματογένεση και τη δυνητική γονιμοποιητική ικανότητα του εκσπερματίσματος. Επιπλέον, η ταυτοποίηση γονιδίων που εμπλέκονται στον μηχανισμό της σπερματογένεσης και στα ποιοτικά χαρακτηριστικά του σπέρματος αποτελεί ανεκτίμητη πληροφορία για την επιλογή των αρσενικών με βάση την ποιότητα του σπέρματος. Η παρούσα μελέτη αφορά στη σύγκριση των αποτελεσμάτων της εργαστηριακής κατάταξης των εκπερματισμάτων 6 κάπρων σε υψηλής και μειωμένης γονιμότητας με βάση την ποιότητα του σπέρματος από τα στοιχεία που τηρούνται στην εκμετάλλευση για τις επιστροφές και τα ποσοστά σύλληψης. Επιπλέον διερευνήθηκε η ύπαρξη πιθανών πολυμορφισμών σε πέντε γονίδια P450scc, P45017a, P450arom, 3b-HSD, StAR, μετά από λήψη αίματος. Στην έρευνα μας, συμπεριελήφθηκαν 6 κάπροι και συλλέχθηκαν 48 (6x8) εκσπερματίσματα σε διάστημα 4 μηνών. Τα δείγματα σπέρματος αραιώνονταν σε τελική συγκέντρωση 30x106 σπερματοζωαρίων ανά δόση και χρησιμοποιούνταν στην εκμετάλλευση για την εφαρμογή τεχνητής σπερματέγχυσης. Ταυτόχρονα, κλάσμα από κάθε δείγμα σπέρματος μεταφερόταν εντός μιας ώρας στην Κλινική Παραγωγικών Ζώων της Κτηνιατρικής Σχολής ΑΠΘ σε ισοθερμικό δοχείο θερμοκρασίας 16-18οC και ακολουθούσε εργαστηριακή εξέταση. Οι παράμετροι που εκτιμήθηκαν σε κάθε δείγμα σπέρματος ήταν: η ζωτικότητα, η κινητικότητα και οι επιμέρους κινήσεις των σπερματοζωαρίων, η μορφολογία, η βιοχημική δραστηριότητα της κυτταρικής μεμβράνης και η ακεραιότητα του DNA του πυρήνα των σπερματοζωαρίων. Η εκτίμηση της ζωτικότητας και της μορφολογίας έγινε μετά από εφαρμογή διπλής χρώσης εωσίνης-νιγροσίνης. Η κινητικότητα και οι επιμέρους μορφές κίνησης των σπερματοζωαρίων εξετάστηκαν με αναλυτή υποβοηθούμενο από ηλεκτρονικό υπολογιστή (CASA). Ο έλεγχος της βιοχημικής δραστηριότητας της κυτταρικής μεμβράνης των σπερματοζωαρίων έγινε με την εφαρμογή της δοκιμής HOST (HOST, Hyposmotic Swelling Test). Για τον έλεγχο της ακεραιότητας του DNA του πυρήνα των σπερματοζωαρίων εφαρμόστηκε η δοκιμή της πορτοκαλόχρωμης ακριδίνης (AOT-Acridine Orange Test). Για την απομόνωση του DNA από το αίμα κάθε κάπρου, εφαρμόστηκε η αλυσιδωτή αντίδραση της πολυμεράσης PCR και διερευνήθηκε η ύπαρξη πολυμορφισμών στα 5 γονίδια. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού Statistical Analysis Systems version 9.0 (SAS Institute Inc., 1996, Cary, N.C., USA) με το επίπεδο σημαντικότητας να ορίζεται στο p<0,5. Τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι η συνολική κινητικότητα κυμάνθηκε σε φυσιολογικές τιμές και στις δύο ομάδες κάπρων, με την ομάδα των κάπρων υψηλής γονιμότητας να εμφανίζουν υψηλότερες τιμές. Παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά στην ισχυρή προοδευτική κίνηση μεταξύ των δύο ομάδων % («Υψηλής γονιμότητας»: 73,09 ± 2,64, «Μειωμένης γονιμότητας»: 64,06 ± 2,64). Επιπλέον, υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά στο ποσοστό των ταχέων κινούμενων σπερματοζωαρίων («Υψηλή γονιμότητα»: 62,88 ± 2,79, «Μειωμένη γονιμότητα»: 53,60 ± 2,79) και στο ποσοστό εκείνων που κινούνταν με χαμηλή ταχύτητα («Υψηλή γονιμότητα»: 9,28 ± 1,94, «Μειωμένη γονιμότητα»: 17,00 ± 1,94). Οι περισσότερες από τις επιμέρους κινήσεις των σπερματοζωαρίων εμφάνισαν καλύτερες τιμές στην ομάδα των κάπρων υψηλής γονιμότητας, ενώ παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά στις VCL, VSL, BCF, WOB μεταξύ των δύο ομάδων. Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά ως προς την ζωτικότητα και τη μορφολογία των σπερματοζωαρίων μεταξύ των δύο ομάδων κάπρων, όμως παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά ως προς τις μορφολογικές ανωμαλίες της ουράς («Υψηλή γονιμότητα»: 3,42 ± 0,23, «Μειωμένη γονιμότητα»: 4,47 ± 0,23). Όσον αφορά στη βιοχημική δραστηριότητα της κυτταρικής μεβράνης των σπερματοζωαρίων παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά («Υψηλή γονιμότητα»: 60,30 ± 1,16, «Μειωμένη γονιμότητα»: 49,24 ± 1,16). Ο κατακερματισμός του DNA ήταν σχεδόν μηδενικός και στις δύο ομάδες. Τέλος, δεν ανιχνεύτηκαν πολυμορφισμοί και μεταλλάξεις στα γονίδια που επιλέχτηκαν, αφήνοντας περιθώρια για περαιτέρω διερεύνηση.
Sperm quality assessment involves qualitative and quantitative indicators, measurable at laboratory level, reflecting to a certain extent the production capacity of sperm and partly the potential fertilization capacity of the ejaculation. In addition, the identification of genes involved in the spermatogenesis mechanism and in the qualitative characteristics of the sperm is invaluable information for the selection of males based on sperm quality. This particular study refers to the comparison of the results of the laboratory classification of 6 boars' ejaculates in high and low fertility based on the quality of the semen from the data kept in the farm from estrus return rates and fertility rates. Furthermore, possible polymorphisms were investigated in five genes P450scc, P45017a, P450arom, 3b-HSD, StAR, after blood sampling. In our research, six boars were involved as semen donors and 48 (6x8) ejaculates were collected over 4 months. The sperm samples were diluted in a final concentration of 30 x 106 sperm / ml and they were used in the farm. At the same time, an aliquot of each sperm sample was transferred within 1 hour to the lab of the Farm Animal Clinic of the Veterinary Medicine School of Aristotle University in an isothermal box and stored at 16-18oC. The parameters that were estimated for each sample of semen were: viability, motility and the individual kinetic parameters of spermatozoa, morphology, biochemical activity of the cell membrane and DNA fragmentation. Vitality and morphology were estimated after the application of double staining eosin-nigrosin. Motility and kinetic characteristics of spermatozoa were examined by computer assisted semen analyzer (CASA). The biochemical activity of the spermatozoa cell membrane was examined by applying the HOST (Hyposmotic Swelling Test) test. The Acridine Orange Test (AOT) was used for the evaluation of sperm nuclear chromatin integrity. In order to isolate the DNA from the blood of each boar, the PCR polymerase chain reaction was performed and the existence of polymorphisms in the 5 genes was investigated. Collected data were analyzed with the use of a General Linear Mixed Model by the statistical software: Statistical Analysis Systems version 9.0 (SAS Institute Inc., 1996, Cary, N.C., U.S.A.) and the level of significance was set at p<0.05. Although our results showed that the total motility varied in normal values in both boar groups, the group of high fertility indicated higher values. Statistical significant differences were found between groups A and B in progressive motility % (“high fertility”: 73,09 ± 2,64, “low fertility”: 64,06 ± 2,64). Additionally, there was a statistically significant difference in the percentage of rapid moving spermatozoa (“high fertility”: 62.88 ± 2.79, “low fertility”: 53.60 ± 2.79) and in the percentage of those who moved slowly (“high fertility”: 9.28 ± 1.94, “low fertility”: 17.00 ± 1.94). Most of the individual kinetic parameters of spermatozoa showed better values in the group of high fertility boars, while a statistically significant difference was observed in VCL, VSL, BCF, WOB between the two groups. No statistically significant differences were found between the two groups of boars in vitality and morphology, but there was statistically significant difference in morphological tail abnormalities ("high fertility ": 3.42 ± 0.23, "low fertility ": 4,47 ± 0,23). As far as the biochemical activity of the spermatozoa cell membrane is concerned, a statistically significant difference ("high fertility ": 60.30 ± 1.16, "low fertility ": 49.24 ± 1.16) was observed. DNA fragmentation was almost zero in both groups. Finally, polymorphisms and mutations in the selected genes were not detected and this fact might require further research.
Advisor name: Λυμπερόπουλος, Αριστοτέλης
Examining committee: Λυμπερόπουλος, Αριστοτέλης
Χατζηπλής, Δημήτριος
Τσακμακίδης, Ιωάννης
Publishing department/division: Τμήμα Ζωικής Παραγωγής
Publishing institution: teithe
Number of pages: 153
Appears in Collections:Μεταπτυχιακές Διατριβές

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Stravogianni_.pdf3.62 MBAdobe PDFView/Open



 Please use this identifier to cite or link to this item:
http://195.251.240.227/jspui/handle/123456789/14027
  This item is a favorite for 0 people.

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.